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噬菌体Chy5的生物学和基因组学特征 认领
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作者 莉莎 刘平 +1 位作者 邬亭亭 郭述良 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期462-468,共7页
目的筛选能感染结核分枝杆菌的溶源性噬菌体,了解其生物学及遗传学信息。方法从土壤中分离纯化噬菌体;电镜观察噬菌体形态;单斑法测定宿主谱;提取噬菌体DNA,鸟枪法随机测序。采用DNAStar软件包分析基因组成分,Glimmer3.0、GeneMark软件... 目的筛选能感染结核分枝杆菌的溶源性噬菌体,了解其生物学及遗传学信息。方法从土壤中分离纯化噬菌体;电镜观察噬菌体形态;单斑法测定宿主谱;提取噬菌体DNA,鸟枪法随机测序。采用DNAStar软件包分析基因组成分,Glimmer3.0、GeneMark软件预测基因功能,同时做共线性分析。分离溶源菌,通过紫外线诱导试验、超免反应验证噬菌体溶源性。结果分离到一株新的噬菌体Chy5,其头部直径(61.5±1.4)nm,尾部长度(114.1±2.1)nm,为长尾噬菌体,可感染敏感及耐药结核菌株。Chy5基因组全长51214 bp,G+C含量63.60%,与噬菌体D29基因组最相似,有88个推定基因,含有编码整合酶和阻遏蛋白的基因以及attP位点。经紫外线诱导Chy5溶源菌可形成噬菌斑,Chy5与其溶源菌共培养会发生超免反应。结论分离到一株新的能感染敏感及耐药结核菌的溶源性噬菌体Chy5,其基因组与噬菌体D29相似,有望应用于构建荧光报告噬菌体。 展开更多
关键词 分枝杆菌噬菌体Chy5 基因组 结核菌
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以呼吸困难为主诉的非器质性呼吸困难与支气管哮喘临床特点对比研究 认领 被引量:8
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作者 姚韬 敖敏 +2 位作者 彭印印 莉莎 郭述良 《上海交通大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2017年第7期959-963,共5页
目的 · 调查并对比分析以呼吸困难为主诉的非器质性呼吸困难和支气管哮喘的临床特征。方法 · 连续入选呼吸科门诊因呼吸 困难就诊的性别与年龄相匹配、身高与体质量相接近的非器质性呼吸困难和支气管哮喘患者各74 例作为调查... 目的 · 调查并对比分析以呼吸困难为主诉的非器质性呼吸困难和支气管哮喘的临床特征。方法 · 连续入选呼吸科门诊因呼吸 困难就诊的性别与年龄相匹配、身高与体质量相接近的非器质性呼吸困难和支气管哮喘患者各74 例作为调查对象,对 2 组患者行医 院焦虑抑郁量表、Nijmegen 症状学问卷和阿森斯失眠量表问卷调查,收集 2 组患者的症状描述语、临床症状、有效睡眠时间和肺功能 指标并作对比分析。结果 · 非器质性呼吸困难组倾向于精神心理方面的描述,支气管哮喘组侧重于气流受限的描述。非器质性呼吸困 难组多以心因性症状为主要表现,且睡眠时间少于支气管哮喘组(P〈0.05);焦虑评分、抑郁评分、Nijmegen 评分、阿森斯失眠问卷 评分、第 1 秒用力呼气容积、第 1 秒用力呼气容积占预计值的百分比、用力肺活量占预计值的百分比、一秒率均大于支气管哮喘组, 差异均有统计学意义(P〈0.05);用力肺活量2 组差异无统计学意义(P〉0.05)。 结论 · 非器质性呼吸困难组的焦虑、抑郁、失眠比 支气管哮喘组更加明显,支气管哮喘组肺功能大多存在异常。鉴别两者时,临床医师需重视情绪、睡眠、躯体化症状等相关病史的询 问,行肺功能检查,认识两者的临床特点,降低漏诊率及误诊率。 展开更多
关键词 呼吸困难 支气管哮喘 焦虑 抑郁 失眠
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噬菌体TM4、Guo1和D29对静止期结核菌裂解作用初步研究 认领 被引量:4
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作者 柳岩 莉莎 +2 位作者 姚义勇 曹俊 郭述良 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期28-32,共5页
目的 研究噬菌体TM4、Guo1、D29能否裂解静止期结核菌。方法 采用密闭培养至对数生长期的结核分枝杆菌构建静止期结核菌模型;采用药敏检测、金胺o-尼罗红荧光染色和电镜观察作为检测模型方法;采用most probable number(MPN)法计数作... 目的 研究噬菌体TM4、Guo1、D29能否裂解静止期结核菌。方法 采用密闭培养至对数生长期的结核分枝杆菌构建静止期结核菌模型;采用药敏检测、金胺o-尼罗红荧光染色和电镜观察作为检测模型方法;采用most probable number(MPN)法计数作为裂解作用的检测指标。结果 密闭培养11个月的静止期结核菌模型构建成功;经不同处理后,MPN计数结果为对照组1100,Guo1组23,TM4组23,D29组600,RFP组673,INH组887;与对照组相比,Guo1组和TM4组菌量明显减少(P〈0.01,P〈0.01),D29组菌量减少不明显(P=0.05);与RFP组相比,Guo1组和TM4组菌量亦明显减少(P〈0.05,P〈0.05),D29组菌量减少不明显(P〉0.05);Guo1组和TM4组菌量无差异。结论 噬菌体TM4和Guo1能够裂解静止期结核菌,噬菌体D29不能裂解静止期结核菌,噬菌体TM4和Guo1裂解能力无差别。 展开更多
关键词 噬菌体 静止期结核菌 裂解 结核病
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噬菌体TM4 motif3蛋白制备及其复苏结核休眠菌的作用 认领
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作者 张莉 莉莎 +2 位作者 姚义勇 柳岩 郭述良 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期241-244,共4页
目的 通过原核表达分枝杆菌噬菌体TM4 motif3蛋白和构建结核分枝杆菌标准株H37Rv休眠菌模型,检测motif3蛋白对结核休眠菌的复苏作用。方法 利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增噬菌体TM4 motif3基序,将PCR产物连接至表达载体p ET-28a(+... 目的 通过原核表达分枝杆菌噬菌体TM4 motif3蛋白和构建结核分枝杆菌标准株H37Rv休眠菌模型,检测motif3蛋白对结核休眠菌的复苏作用。方法 利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增噬菌体TM4 motif3基序,将PCR产物连接至表达载体p ET-28a(+),重组质粒测序正确后,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,采用非变性方法对表达蛋白进行纯化,并将不同浓度的motif3蛋白加入结核休眠菌模型中,观察其对结核休眠菌的复苏效果及异烟肼对复苏后结核菌的杀灭作用。结果 得到融合组氨酸残基的motif3重组蛋白,在12.65 ku处出现目的条带,浓度为1.1×104pmol·L-1的motif3蛋白对结核休眠菌具有明显的复苏作用且复苏后结核菌能被异烟肼杀灭。结论 噬菌体TM4motif3蛋白对结核休眠菌具有复苏作用。 展开更多
关键词 噬菌体TM4 基因表达 结核休眠菌 复苏
分支杆菌噬菌体Leo生物学特性及抗结核作用 认领 被引量:4
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作者 莉莎 邬亭亭 +3 位作者 刘平 张莉 姚义勇 郭述良 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期193-198,共6页
目的明确分支杆菌噬菌体Leo的生物学特性及其抗结核作用,为"鸡尾酒疗法"筛选候选噬菌体。方法采用双层平板法制备噬菌体Leo,观察噬菌斑形态;电镜观察噬菌体颗粒形态;提取噬菌体DNA,限制性内切酶酶切分析确定其核酸类型;以不同MOI扩增... 目的明确分支杆菌噬菌体Leo的生物学特性及其抗结核作用,为"鸡尾酒疗法"筛选候选噬菌体。方法采用双层平板法制备噬菌体Leo,观察噬菌斑形态;电镜观察噬菌体颗粒形态;提取噬菌体DNA,限制性内切酶酶切分析确定其核酸类型;以不同MOI扩增噬菌体Leo,确定最佳MOI及最低MOI;通过一步生长曲线,确定潜伏期及裂解量;采用终点滴定反浊法测定耻垢分支杆菌对噬菌体Leo的耐受突变率;检测噬菌体Leo对酒精、温度的耐受性及在不同pH下的裂解能力;通过体外杀结核分枝杆菌实验,明确噬菌体Leo对结核分枝杆菌的杀灭作用。结果 Leo噬菌斑圆形透明,边缘清晰,含对称的多面体头部,直径(70±3.0)nm,可弯曲的尾部,尾长(211±31.7)nm;其基因组能被限制性内切酶HindⅢ、BglⅠ切开;最佳MOI为0.0 0001,最低MOI为0.0 001,潜伏期为150min,裂解量74,耐受突变率为10-7。Leo对温度、酒精敏感,在pH 7.4和pH 5.0时均能裂解宿主菌。Leo作用于结核分支杆菌72h后,Leo组菌量明显低于空白组(P〈0.05)。结论分支杆菌噬菌体Leo属长尾噬菌体科,双链DNA噬菌体,能够杀灭结核分支杆菌,可作为"鸡尾酒疗法"的候选噬菌体。 展开更多
关键词 分支杆菌噬菌体Leo 生物学特性 结核分支杆菌
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分枝杆菌噬菌体Guo1环状基因组特征及生物学特性分析 认领 被引量:2
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作者 姚义勇 莉莎 +2 位作者 张莉 郭述良 柳岩 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1529-1538,共10页
【目的】初步研究分枝杆菌噬菌体Guo1环状基因组特征及生物学特性。【方法】采用鸟枪法和重叠群组装策略完成Guo1全基因组测序;使用DNAStar、t RNAscan-SE、Promoter predictions、TRF、Glimmer、BLAST软件分别对噬菌体的一般基因组学... 【目的】初步研究分枝杆菌噬菌体Guo1环状基因组特征及生物学特性。【方法】采用鸟枪法和重叠群组装策略完成Guo1全基因组测序;使用DNAStar、t RNAscan-SE、Promoter predictions、TRF、Glimmer、BLAST软件分别对噬菌体的一般基因组学特征、t RNA、启动子、串联重复序列和编码基因进行分析;运用BLAST软件检索与Guo1基因组相似的噬菌体并构建系统进化树,推断Guo1的分群;测定最佳感染复数、一步生长曲线以及对紫外线、氯仿、酒精、温度、p H的敏感性。【结果】噬菌体Guo1的基因组为全长40 086 nt的环状双链DNA,属于G群分枝杆菌噬菌体;含有59个推定基因,7个启动子序列和3个串联重复序列;Guo1对紫外线有较强抵抗性,对酒精、氯仿和高温敏感,最适温度为37°C,最适p H为7.0,最佳感染复数为0.01,潜伏期120 min,裂解期120 min,裂解量为47个。【结论】Guo1是首次发现的具有环状双链DNA结构的G群分枝杆菌噬菌体,完成了Guo1的全基因组测序,并初步分析了Guo1的基因组特征和生物学特性。 展开更多
关键词 Guo1 分枝杆菌噬菌体G群 环状基因组 生物学特性
分枝杆菌噬菌体Chy3对人气道上皮细胞16HBE生长及功能的影响 认领
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作者 熊欣 甘易玲 +3 位作者 徐莉 莉莎 张莉 郭述良 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1202-1206,共5页
目的:探讨不同滴度的分枝杆菌噬菌体Chy3对人气道上皮细胞16HBE生长及功能的影响。方法:不同滴度噬菌体Chy3作用于人气道上皮细胞后,采用倒置显微镜观察细胞生长形态变化,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法检... 目的:探讨不同滴度的分枝杆菌噬菌体Chy3对人气道上皮细胞16HBE生长及功能的影响。方法:不同滴度噬菌体Chy3作用于人气道上皮细胞后,采用倒置显微镜观察细胞生长形态变化,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法检测细胞上清液中细胞因子分泌水平,RT-PCR和Western blot分别检测上皮细胞黏蛋白MUC5AC mRNA和蛋白表达水平。结果:不同滴度噬菌体Chy3作用于人气道上皮细胞一段时候后,细胞的生长形态、存活率、凋亡率、细胞因子分泌水平以及黏蛋白MUC5AC表达与正常组比较差异均无统计学意义(P〉0.05)。结论:分枝杆菌噬菌体Chy3无论高低滴度对体外培养人气道上皮细胞生长和功能均无明显影响,有较好的安全性。 展开更多
关键词 分枝杆菌噬菌体 人气道上皮细胞 安全性 白细胞介素-6/白细胞介素-8 MUC5AC
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分枝杆菌噬菌体Leo的生物学和基因组学特征 认领 被引量:2
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作者 莉莎 邬亭亭 +1 位作者 刘平 郭述良 《华中科技大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期506-511,共6页
目的 筛选能有效裂解结核分枝杆菌的噬菌体,并了解其生物学和遗传学信息.方法 双层平板法扩增噬菌体,观察噬菌斑形态;电镜观察噬菌体颗粒形态;单斑法检测噬菌体宿主谱.采用λ噬菌体提取试剂盒提取噬菌体DNA,鸟枪法测序,得到的DNA序列用P... 目的 筛选能有效裂解结核分枝杆菌的噬菌体,并了解其生物学和遗传学信息.方法 双层平板法扩增噬菌体,观察噬菌斑形态;电镜观察噬菌体颗粒形态;单斑法检测噬菌体宿主谱.采用λ噬菌体提取试剂盒提取噬菌体DNA,鸟枪法测序,得到的DNA序列用Phred/PhraD/Consedh软件包组装,拼接重叠群,PCR扩增重叠群缺口.采用DNAStar软件包、Glimmer3.0基因预测软件、Promoter prediction/Prokaryotic程序进行基因成分分析,基因功能预测,启动子区预测,并同时对Leo作共线性分析及构建系统进化树.结果 噬菌体Leo由多面体头部和尾部构成,头部直径(70.0±3.0)nm,尾长(211.0±31.7)nm.其噬菌斑清晰透明,能裂解不同的结核分枝杆菌临床分离株.Leo基因组全长39 981 bp,GC含量66.86%,含3个可能的启动子区,不含串联重复序列和tRNA区.Leo含59个基因,gene32编码整合酶,不含编码阻遏蛋白的基因和不利基因,Leo与BPs和Angel相似性最高.结论 噬菌体Leo是一株不含不利基因的裂解性噬菌体,能裂解结核分枝杆菌,可以作为鸡尾酒疗法的候选噬菌体. 展开更多
关键词 分枝杆菌噬菌体Leo 基因组 结核分枝杆菌
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行为疗法治疗严重心理问题个案一例 认领
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作者 莉莎 《校园心理》 2011年第6期 422-424,共3页
本文通过收集来访者的资料,排除精神病及神经症,进一步与一般心理问题和性心理障碍、恋物癖进行鉴别诊断,最终确诊为严重心理问题。咨询师通过对来访者采用认知疗法和厌恶疗法等治疗方法,成功地帮助来访者解除了焦虑的情绪,并对其... 本文通过收集来访者的资料,排除精神病及神经症,进一步与一般心理问题和性心理障碍、恋物癖进行鉴别诊断,最终确诊为严重心理问题。咨询师通过对来访者采用认知疗法和厌恶疗法等治疗方法,成功地帮助来访者解除了焦虑的情绪,并对其不良行为进行了矫正,使来访者摆脱困境,恢复社会功能。 展开更多
关键词 一般心理问题 治疗方法 行为疗法 个案 性心理障碍 来访者 鉴别诊断 厌恶疗法
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女子气与男子气—初探李清照性格两面性 认领
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作者 莉莎 《宿州教育学院学报》 2011年第2期 22-23,33,共3页
李清照是我国文学史上极为少见的优秀女性作家之一,其诗作与词作无论在思想上或风格上都大相径庭。因此,本文立足科学的现代心理学理论,探求李清照诗与词思想性的差异,展示二者在同一作家笔下的不同风采,从而能更全面、系统地探求这位... 李清照是我国文学史上极为少见的优秀女性作家之一,其诗作与词作无论在思想上或风格上都大相径庭。因此,本文立足科学的现代心理学理论,探求李清照诗与词思想性的差异,展示二者在同一作家笔下的不同风采,从而能更全面、系统地探求这位女作家的性格特质,进而展示其整体的思想内涵和人格魅力。 展开更多
关键词 李清照 诗作 词作 男子气 女子气
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浅谈幼儿音乐感受力的培养 认领
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作者 莉莎 《教师》 2013年第16期106-106,共1页
从感知音乐的节拍、节奏到感受音乐的性质、意境,再到运用动作技能将感受的音乐表现出来,使幼儿的音乐感受力得到培养,各方面的能力得到锻炼。
关键词 幼儿音乐 感受力 培养
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噬菌体Guo1、Leo对不同模型休眠期结核分枝杆菌的裂解作用 认领
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作者 莉莎 郭述良 《中国医药导报》 CAS 2019年第36期4-7,13共5页
目的研究噬菌体Guo1、Leo对不同模型休眠期结核分枝杆菌的裂解作用。方法利用ClustalX软件作多重序列对比,寻找噬菌体Guo1、Leo的motif3基序。分别用缺氧模型及缺钾模型建模方法构建休眠期结核分枝杆菌模型。取缺氧及缺钾模型诱导的休... 目的研究噬菌体Guo1、Leo对不同模型休眠期结核分枝杆菌的裂解作用。方法利用ClustalX软件作多重序列对比,寻找噬菌体Guo1、Leo的motif3基序。分别用缺氧模型及缺钾模型建模方法构建休眠期结核分枝杆菌模型。取缺氧及缺钾模型诱导的休眠期结核菌菌液,将其分别随机分成5组,每组设3个复管,每支试管装2 mL菌液。再向各组试管中分别加入100μL的异烟肼(终浓度5μg/mL,异烟肼组)、利福平(终浓度5μg/mL,利福平组)、噬菌体Leo(滴度2.6×108 PFU/mL,Leo组)、噬菌体Guo1(滴度3.26×108 PFU/mL,Guo1组),对照组加入等量ddH 2 O。利用最大可能数法,分别检测休眠期结核菌对异烟肼、利福平的耐药性及噬菌体对休眠期结核菌的裂解作用。结果噬菌体Guo1、Leo的卷尺蛋白中均含有motif3基序,且其motif3基序含6个高度保守的氨基酸残基、1个高度保守的异亮氨酸-色氨酸位点。当作用于缺氧模型休眠期结核菌时,与利福平组、异烟肼组较较,Guo1组菌量明显减少(P<0.05);当作用于缺钾模型休眠期结核菌时,与利福平组比较,Leo组菌量明显减少(P<0.05)。缺钾模型对异烟肼、利福平的耐药率明显高于缺氧模型。结论相较于缺氧模型,缺钾模型能诱导结核菌进入更深的休眠状态。噬菌体Guo1对缺氧模型诱导的休眠期结核菌有裂解作用,噬菌体Leo对缺钾模型诱导的休眠期结核菌有裂解作用。 展开更多
关键词 噬菌体 休眠期结核菌 缺氧模型 缺钾模型 裂解作用
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缺氧模型和多因素模型构建结核休眠菌模型比较研究 认领 被引量:4
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作者 莉莎 姚义勇 +2 位作者 张莉 柳岩 郭述良 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期327-331,共5页
目的比较缺氧模型及多因素模型两种结核休眠菌建模方法的优劣。方法利用缺氧因素构建缺氧模型;利用低氧(5%O2)、高CO2(10%CO2)、弱酸(pH 5.0)及营养缺乏(10%7H9液体培养基)多种因素构建多因素模型。分别在第20d、30d时取样,用金... 目的比较缺氧模型及多因素模型两种结核休眠菌建模方法的优劣。方法利用缺氧因素构建缺氧模型;利用低氧(5%O2)、高CO2(10%CO2)、弱酸(pH 5.0)及营养缺乏(10%7H9液体培养基)多种因素构建多因素模型。分别在第20d、30d时取样,用金胺O-尼罗红染色法染色,在共聚焦显微镜下观察结核菌脂质聚集及失去抗酸性的情况;用电镜观察结核菌细胞壁增厚情况;并检测其对利福平的耐药率。在建模30d时,将等量的两种模型分别转入新鲜7H9液体培养基中,观察并比较其复苏情况。结果建模20d时,两模型组细菌均出现脂质聚集及失去抗酸性,无明显差异。两模型组细菌均未出现明显细胞壁增厚。建模30d时,多因素模型组细菌几乎都表现出脂质聚集及失去抗酸性,而缺氧模型组仍有部分细菌未表现出脂质聚集及失去抗酸性。同时,多因素模型组在建模30d还出现了细胞壁增厚的细菌,缺氧模型组则无明显改变。多因素模型组细菌对利福平的耐药率明显高于缺氧模型组,且多因素模型组细菌复苏的菌量远小于缺氧模型组。结论多因素模型较缺氧模型能更快诱导结核菌进入休眠状态,且诱导出的结核休眠菌状态更稳定。 展开更多
关键词 结核休眠菌 缺氧模型 多因素模型 比较
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